产品货号:
GS0039
中文名称:
通用型DNA提取纯化试剂盒
英文名称:
SPIN-10 Universal Column DNA Purification Kit
产品规格:
100次
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是集凝胶DNA回收,质粒抽提,基因组DNA提取和纯化于一体的通用型试剂盒。
保存:室温
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- 一盒多用,避免浪费,满足科研的多种需要。
- 洗脱体积小,DNA浓度高,DNA纯度、回收率更好。
- 方便快捷,大多数抽提都可以在20分钟之内完成。
- 试剂盒所有试剂和材料与专用试剂盒完全一样。
- 从琼脂糖胶中回收DNA。
- 从溶液中回收和浓缩DNA,去除蛋白质、多糖等杂质。
- 从细菌中快速小规模抽提质粒。
- 从各种组织和细胞中小规模抽提基因组DNA。
组分 | 规格 |
Binding Buffer II | 20mL |
RNase A(10mg/mL) | 210μL |
Solution I | 14mL |
Solution II | 14mL |
Solution III | 20mL |
Digestion Buffer | 25mL |
Wash Solution | 24mL |
Elution Buffer | 10mL |
Proteinase K | 200μL |
SPIN-10吸附柱及收集管(2mL) | 100套 |
保存:室温
- 使用前先将RNase A加入Solution I溶液中,然后存放于4℃,以备使用。
- 气温低时,溶液II会出现不溶物,37℃加热溶解后方可使用。
- 首次使用前,必须在Wash Solution瓶中加入4倍体积的无水乙醇,充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧,以保持Wash Solution中的乙醇含量。如果您发现Wash Solution由于运输或保管不当造成容量严重不准,请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。
- Elution Buffer为2mM Tris-HCl,pH8.5。试验后,4℃保存。TE pH8.0或者水(pH>7.0)均可以使用,但是DNA的洗脱效率通常要低20%左右。
- 本试剂盒中提供的Proteinase K溶液为特别优化的配方,方便使用,而且非常稳定,可以在室温保存半年以上而活性不受明显影响,如需进一步延长保存期限,请置于4℃保存。
- 从细菌中提取质粒
- 将过夜培养的1~2mL细菌高速离心15秒,彻底去除上清。
- 加入250μL Solution I,用枪头或振荡器充分悬浮细菌。
- 加入250μL Solution II,立即温和混匀(倾斜45°,顺一个方向,慢慢旋转离心管),使细菌裂解,室温放置2分钟。
- 不能用振荡器混匀,也不能用力混匀,否则会出现基因组DNA污染。
- 加入350μL Solution III,立即上下颠倒5~10次,使之充分中和,室温放置5分钟。
- 12000rpm高速离心10分钟。
- 将SPIN-10柱放入收集管中,吸取上清,加到SPIN-10柱中,室温放置2分钟,8000rpm离心30秒。
- 不要吸取沉淀,否则会出现基因组DNA盒蛋白质污染。
- 去掉收集管中的废液,将SPIN-10柱放入同一支收集管中,吸取500μL Wash Solution到SPIN-10柱,10000离心1分钟。
- 重复步骤7.
- 去掉收集管中的废液,将SPIN-10柱放回收集管中,12000rpm离心2分钟。
- 将SPIN-10柱放入新的洁净1.5mL离心管中,加50μL Elution Buffer,室温或37℃下放置2分钟,10000rpm离心1分钟,即得DNA样品。
- 为了提高DNA的得率,您可以将加入Elution Buffer的SPIN-10柱于55~80℃放置2分钟,然后离心。
- 将过夜培养的1~2mL细菌高速离心15秒,彻底去除上清。
- 基因组DNA提取方法
- 样品准备
- 血液:血液必须用EDTA或柠檬酸抗凝。因为从用肝素抗凝的血液抽提的DNA常有PCR抑制剂存在,不能用于PCR反应。通常从200μL血液可获约2~4μg DNA。如果需要较大量的DNA,可以用500μL血液,处理方法如下:500μL血液中加入1mL无菌水,5000rpm,离心2分钟。用200μL TE将白细胞悬浮起来备用。新鲜血液样品如不立即用于DNA抽提,可置于4℃暂存,但不要超过1个月,若长期储存,请分装成200μL,储存于-20℃。
- 血清:最好使用新鲜血清样品,否则样品应分装成200μL/管,-20℃保存。
- 细胞:通过离心将细胞收集起来,用200μL TE将细胞悬浮,细胞量在0.4~0.6×106之间即可获得足够量的DNA。
- 组织:25~30mg动物组织(新鲜或冷冻组织均可)或者50~100mg新鲜植物叶片组织在液氮中碾碎,将粉末收集到1.5mL离心管中,用200μL TE悬浮。
- 应避免多次冻融样品,因为每次冻融都将大大降低完整DNA的产率。
- 本试剂盒只适用于新鲜幼嫩的植物叶片组织,如果用于多糖多酚含量较高的其他植物组织和叶片,建议使用专门的植物基因组DNA快速抽提试剂盒(货号:GS0063)
- 血液:血液必须用EDTA或柠檬酸抗凝。因为从用肝素抗凝的血液抽提的DNA常有PCR抑制剂存在,不能用于PCR反应。通常从200μL血液可获约2~4μg DNA。如果需要较大量的DNA,可以用500μL血液,处理方法如下:500μL血液中加入1mL无菌水,5000rpm,离心2分钟。用200μL TE将白细胞悬浮起来备用。新鲜血液样品如不立即用于DNA抽提,可置于4℃暂存,但不要超过1个月,若长期储存,请分装成200μL,储存于-20℃。
- 在按样品制备方法的200μL样品中,加入400μL Digestion Buffer,混匀;加入4μL Proteinase K,混匀,55℃保温10~20分钟。
- 应按次序加入,不得将Proteinase K先加入Digestion Buffer中,再加入到样品中。
- 保温时间取决于样品的类型。对于细胞样品,55℃保温5~10分钟足以使细胞裂解,释放出基因组DNA。而对于组织类样品,55℃保温时长则视降解效果而定。降解完全的样品应是透明粘稠液体。组织类样品一般在1~3小时内作用完全。过夜处理通常不影响产率。
- 应按次序加入,不得将Proteinase K先加入Digestion Buffer中,再加入到样品中。
- 加入260μL无水乙醇,混匀,然后用1mL Tip头将样品全部转移到SPIN-10柱,柱子放入2mL收集管。
- 用台式离心机,8000rpm室温离心1分钟。也可适当降低离心转速。
- 取下SPIN-10柱,弃取离心管中的废液。将柱子放回同一个离心管中,加入500μL Wash Solution,10000rpm室温离心30秒。
- 重复步骤5一次。
- 取下SPIN-10柱,弃去收集管中的全部废液。将柱子放回统一收集管中,然后室温10000rpm离心30秒,以出去残留的Wash Solution。
- 在SPIN-10柱中央加入100μL Elution Buffer,将SPIN-10柱放入新的干净1.5mL或2.0mL离心管中,室温放置2分钟。
- 10000rpm室温离心1分钟。收集管中的液体即为基因组DNA。根据用途,样品可以4℃或-20℃保存。
- 为提高洗脱效率,可以将SPIN-10柱在55~80℃保温2分钟。
- 如果样品中基因组DNA含量很低,用40μL Elution Buffer洗脱可以提高洗脱液的样品浓度,但产率有所下降。重复步骤8~9,可以提高产率20%。
- 为提高洗脱效率,可以将SPIN-10柱在55~80℃保温2分钟。
- 分光光度计测量DNA含量按1 OD260=50μg基因组DNA,或者使用0.7%琼脂糖凝胶判定DNA的完整性,也可以判定样品中是否有RNA。本试剂盒提取出来的DNA长度可达50kb。
- 血液样品中的DNA产量取决于血细胞数量。
- 从琼脂糖凝胶仅能观察到白细胞基因组DNA,血清中病毒DNA因含量太少,不能用琼脂糖凝胶直接观察。
- 通常50μL PCR反应中用1~5μL DNA。
- 血液样品中的DNA产量取决于血细胞数量。
- 样品准备
- 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段
- 用琼脂糖凝胶电泳将目的DNA片段与其它DNA尽可能分开,然后用干净的手术刀割下含所要回收DNA的琼脂块,放入1.5mL离心管中。判定DNA片段的位置时,要尽可能使用长波长紫外光,在紫外光下照射的时间应尽可能短。
- 按每100mg琼脂糖凝胶加入400μL Binding Buffer II,混匀后置于50~60℃水浴中10分钟,使胶彻底融化。加热融胶时,每2分钟混匀一次。对于高浓度的较(1.5~2%),每100mg胶加入700μL Binding Buffer II,加热融胶的时间可以延长到15分钟,以保证凝胶全部融化。
- 将融化的胶溶液全部转移到SPIN-10柱,柱子放入2mL收集管,室温放置2分钟,用台式离心机,8000rpm室温离心1分钟。
- 取下SPIN-10柱,弃去离心管中的废液。将柱子放回原离心管中,加入500μL Wash Solution,10000rpm室温离心30秒。
- 重复步骤4一次。
- 取下SPIN-10柱,弃去离心管中的全部废液。将柱子放回同一个离心管中,10000rpm室温离心30秒,以除去残留的Wash Solution。
- 将柱子放入新的干净1.5mL或2mL离心管中,在柱子中央加入100μL Elution Buffer,室温放置2分钟,提高洗脱液的温度至55~80℃有利于提高DNA的洗脱效率。
- 10000rpm室温离心1分钟。收集管中的液体即为回收的DNA片段,可立即使用或保存-20℃备用。
- 用琼脂糖凝胶电泳将目的DNA片段与其它DNA尽可能分开,然后用干净的手术刀割下含所要回收DNA的琼脂块,放入1.5mL离心管中。判定DNA片段的位置时,要尽可能使用长波长紫外光,在紫外光下照射的时间应尽可能短。
- 从溶液中回收和浓缩DNA
- 对于纯化基因组:按每100μL DNA溶液加入100μL Bind Buffer II;对于纯化DNA片段(60bp~10kb):按每100μL DNA溶液加300μL Binding Buffer II,混匀,放置2分钟。
- 对于10~40kb DNA片段,也按每100μL DNA溶液加300μL Binding Buffer II,但是回收效率只有30~50%。
- 全部转移到SPIN-10柱,柱子放入2mL收集管,室温放置2分钟,用台式离心机,10000rpm室温离心1分钟。
- 取下SPIN-10柱,弃去离心管中的废液。将柱子放回同一个离心管中,加入500μL Wash Solution,10000rpm室温离心30秒。
- 重复步骤3一次。
- 取下SPIN-10柱,弃去离心管中的全部废液。将柱子放回原离心管中,10000rpm室温离心30秒,以出去残留的Wash Solution。
- 将SPIN-10柱放入新的干净1.5mL或2mL离心管中,在SPIN-10柱中央加入Elution Buffer,室温放置2分钟,提高洗脱温度至55~80℃有利于提高DNA的洗脱效率。
- 10000rpm室温离心1分钟。收集管中的液体即为回收的DNA片段,可立即使用或保存于-20℃备用。
- 对于纯化基因组:按每100μL DNA溶液加入100μL Bind Buffer II;对于纯化DNA片段(60bp~10kb):按每100μL DNA溶液加300μL Binding Buffer II,混匀,放置2分钟。
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